近日,《自然·通訊(Nature Communications)》在線發(fā)表了中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院深圳農(nóng)業(yè)基因組研究所黃三文團隊和美國麻省理工學(xué)院科研團隊合作研究的成果,研究揭示了兩種不同的解除酶底物抑制的代謝工程策略,構(gòu)建了高效異源生物合成類胡蘿卜素的細(xì)胞工廠。該研究為在細(xì)胞工廠消除底物抑制生產(chǎn)高價值化合物研究提供了參考。
近年來,隨著合成生物學(xué)的飛速發(fā)展,利用微生物設(shè)計和創(chuàng)建人工合成細(xì)胞發(fā)酵生產(chǎn)植物天然產(chǎn)物,已作為一種綠色高效的新型生產(chǎn)模式被科學(xué)界及工業(yè)界認(rèn)可。但是,微生物異源生物合成天然產(chǎn)物的效率經(jīng)常受到酶調(diào)控的影響。酶底物抑制效應(yīng)是限制化合物產(chǎn)率的主要因素之一,當(dāng)?shù)孜餄舛冗^高、超過某個閾值時,會觸發(fā)底物抑制效應(yīng),從而降低酶反應(yīng)速率,影響目標(biāo)化合物的合成。
目前在合成生物學(xué)和代謝工程領(lǐng)域,對于如何有效解除底物抑制還未廣泛報道,尤其是底物抑制發(fā)生在天然產(chǎn)物生物合成途徑的中間步驟。
據(jù)介紹,該科研團隊以解脂耶氏酵母異源生物合成β-胡蘿卜素為例,報道了兩種不同的解除酶底物抑制的代謝工程策略。研究首次發(fā)現(xiàn)番茄紅素環(huán)化酶具有底物抑制效應(yīng),高濃度的底物番茄紅素對該酶有強烈抑制,成為解脂耶氏酵母中類胡蘿卜素生物合成的主要瓶頸。
第一種策略是針對番茄紅素環(huán)化酶的蛋白質(zhì)工程,改良后的突變體Y27R可以完全解除底物抑制并且不降低酶活性,使得β-胡蘿卜素產(chǎn)量顯著增加且選擇性達到98%。第二種策略是建立香葉基香葉基焦磷酸合酶介導(dǎo)的流量控制器,調(diào)控代謝流量,限制番茄紅素合成速率,將其濃度控制在抑制水平之下,同時在不觸發(fā)底物抑制的前提下,確保足夠多的代謝流量用于目標(biāo)化合物合成,獲得了與第一種策略相似的β-胡蘿卜素滴度和選擇性。
兩種代謝工程策略被證明同等有效地解除了底物抑制,能夠高效生產(chǎn)β-胡蘿卜素,最終使得β-胡蘿卜素的產(chǎn)量達到39.5克/升。