戴小楓在新疆棉花抗病、高產(chǎn)示范現(xiàn)場(chǎng)展示會(huì)上。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工所供圖
說(shuō)起制約棉花生產(chǎn)的第一大病害,非“黃萎病”莫屬。這是一種被稱為棉花“癌癥”的病害,它常年造成我國(guó)棉花15%以上的減產(chǎn),年直接經(jīng)濟(jì)損失200億元。黃萎病的肆虐讓許多棉花人對(duì)2002年的“棉災(zāi)”記憶猶新:300萬(wàn)公頃棉花枯死或萎蔫,連片棉田減產(chǎn)甚至絕收,棉農(nóng)損失慘重。
黃萎病并非無(wú)藥可醫(yī),培育抗病品種就是公認(rèn)的最經(jīng)濟(jì)有效的防控途徑。然而,長(zhǎng)期以來(lái),黃萎病的為害機(jī)理不清、棉花抗病機(jī)制不明,“兩眼一抹黑”,抗病品種的選育無(wú)從下手,一直是世界性難題。
情況在一項(xiàng)專門針對(duì)棉花黃萎病的“863”計(jì)劃課題下,出現(xiàn)了轉(zhuǎn)機(jī)。
主持該課題的是植保研究出身的中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工所所長(zhǎng)戴小楓研究員,30多年來(lái)他一直從事棉花主要病蟲(chóng)害綜合防治技術(shù)研究工作。為了選育抗黃萎病棉花新種,戴小楓領(lǐng)導(dǎo)的攻關(guān)團(tuán)隊(duì)一頭鉆進(jìn)去就是二十多年。
對(duì)世界性難題求根溯源
黃萎病主要是由“大麗輪枝菌”和“黑白輪枝菌”兩種致病菌導(dǎo)致的土傳真菌病害。它們的寄主極為廣泛,不僅棉花,它們的“魔爪”還伸向了茄子、番茄、黃豆等660種植物,其中僅主要農(nóng)作物就有184種。由于這兩種病原菌可在土壤中存活多年,加之病原菌變異頻繁、致病生態(tài)型多樣,常用的藥物處理、栽培耕作等手段均見(jiàn)效甚微。
要選育出抗病棉種,弄清黃萎病致病機(jī)理、棉花抗病機(jī)制是必由之路和突破口。攻關(guān)團(tuán)隊(duì)通過(guò)調(diào)查統(tǒng)計(jì)、實(shí)地勘訪,并借助分子生物技術(shù)細(xì)致研究,拿到了我國(guó)棉花黃萎病第一手的流行病學(xué)材料。
戴小楓等人統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),自1984年以來(lái),我國(guó)棉花黃萎病發(fā)生危害面積逐年上升,其中1993年、2002年大暴發(fā)導(dǎo)致2/3棉田受災(zāi)。特別是2000年后西北內(nèi)陸棉區(qū)危害加劇,發(fā)病面積超過(guò)50%。他們對(duì)黃萎病菌全基因組重測(cè)序并鑒定了20萬(wàn)個(gè)遺傳變異,發(fā)現(xiàn)病原通過(guò)單核苷酸突變、插入缺失、水平轉(zhuǎn)移和基因獲得與丟失4種分子變異途徑,進(jìn)化出了4種致病變異型。
他們找到了黃萎病長(zhǎng)年肆虐的根本原因:致病性變異導(dǎo)致強(qiáng)致病型菌系的比例快速上升。
在此基礎(chǔ)上,他們開(kāi)發(fā)了58個(gè)鑒定變異型的分子標(biāo)記,創(chuàng)建了菌原變異型的分子監(jiān)測(cè)方法。與此同時(shí),他們還監(jiān)測(cè)到了這些致病菌侵害棉花的動(dòng)態(tài)侵染過(guò)程:黃萎病菌2小時(shí)附著表皮,14天內(nèi)就侵入棉花木質(zhì)部,引發(fā)典型黃萎病癥狀。在這過(guò)程中,熱激蛋白調(diào)控的5個(gè)胞外毒素蛋白是該菌致病的關(guān)鍵——毒素蛋白參與了降解果膠和纖維素,阻塞導(dǎo)管營(yíng)養(yǎng)與水分運(yùn)輸,最終導(dǎo)致棉花“黃萎”。
“我們的研究證明了毒素是因、阻塞是果,兩者共同導(dǎo)致了對(duì)棉花的‘黃萎’危害。”戴小楓告訴《中國(guó)科學(xué)報(bào)》記者,“這澄清了國(guó)際學(xué)術(shù)界長(zhǎng)期懸而未決的‘毒素說(shuō)’與‘阻塞說(shuō)’的爭(zhēng)論。”
黃萎病菌有4種致病變異型,倒逼著攻關(guān)團(tuán)隊(duì)必須構(gòu)建一個(gè)全病圃的抗病品種——新的棉花品種必須對(duì)4種變異致病菌都有抗性,才能保證棉花免遭黃萎病侵害。
不過(guò),要想在眾多棉花品種中找到合適的抗源并選育出抗病種,無(wú)異于大海撈針。因此,他們必須弄清棉花的抗病機(jī)制。
課題團(tuán)隊(duì)通過(guò)多雜交組合單一菌系和復(fù)合菌系接種抗病鑒定與遺傳分析發(fā)現(xiàn),棉花對(duì)黃萎病抗性并非單個(gè)基因作用,而是由多個(gè)主效基因協(xié)同控制。
“黃萎病難治就在于此,多個(gè)主效基因控制,我們只轉(zhuǎn)移一個(gè)兩個(gè)抗病基因根本不靈。”戴小楓打了一個(gè)形象的比方:“就像吃饅頭,吃一個(gè)兩個(gè)吃不飽,必須得吃夠數(shù)。”
在此基礎(chǔ)上,研究人員克隆并鑒定了5個(gè)主效抗病基因的功能,從分子水平上弄清了棉花的抗病機(jī)理:抗病基因協(xié)同識(shí)別病原菌效應(yīng)子,通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)激活乙烯和茉莉酸信號(hào),調(diào)控胞壁蛋白合成以增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)木質(zhì)化水平——細(xì)胞木質(zhì)化強(qiáng),毒素蛋白在棉花內(nèi)便無(wú)計(jì)可施。
至此,棉花抗黃萎病的“多基因協(xié)同控制理論”建立。
不做“愚公”
下一步就是找抗原材料。戴小楓注意到,育種專家在陸地棉里找抗原材料,找了上百年都沒(méi)找到,意味著只在陸地棉里找抗原是“死路一條”。于是,他把目光瞄向了海島棉。海島棉雖然產(chǎn)量、品質(zhì)都不行,但它們抗病性好。就像當(dāng)年袁隆平尋找“野敗”一樣,海島棉身上極有可能攜帶著攻克黃萎病的“秘密武器”。
但在抗病品種選育之前,戴小楓等人還需要解決一個(gè)難題:如何快速準(zhǔn)確地鑒定所育品種的抗性。戴小楓告訴《中國(guó)科學(xué)報(bào)》記者,傳統(tǒng)苗期鑒定,需要在接種以后觀察28天,才能確定抗病情況。這種尺度的鑒定周期,對(duì)于要從成千上萬(wàn)的材料中選育抗病品種的工作而言,不啻于“愚公移山”。
攻關(guān)團(tuán)隊(duì)不甘做“愚公”。在前述研究工作的基礎(chǔ)上,研究人員想到了毒素濃度與葉片黃萎化程度存在相關(guān)性,于是由此著手,建立了毒素濃度與葉片黃化面積關(guān)系的數(shù)學(xué)模型,創(chuàng)建了一套特異、靈敏、高通量的“毒素粗篩法”,一下子將篩選抗病株的周期從28天縮短到兩天。
此外,他們還分離、培養(yǎng)高致病型單孢菌系,直接接種到裸根觀察植株,這樣一來(lái),就可以高效、準(zhǔn)確地鑒定抗病株。“裸根復(fù)篩法”鑒定周期是14天,效率是傳統(tǒng)方法的2倍。
在篩選的抗病株成株期,研究人員還通過(guò)每克土壤孢子數(shù)量與病指之間的關(guān)系建立數(shù)學(xué)模型,創(chuàng)建了定量、連續(xù)、高選擇壓負(fù)荷的鑒定病圃,以確保病圃苗期、成株期抗性鑒定的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。
這還不夠,戴小楓告訴記者,為了確保田間病圃抗性鑒定的表現(xiàn)型與基因型高度一致,他們還研究開(kāi)發(fā)出抗性基因分子標(biāo)記6個(gè),用以抗病基因跟蹤檢測(cè)。這樣一來(lái),棉株是否真的具有抗性,是“李逵”還是“李鬼”一測(cè)便知。
“抗病基因檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用,使得抗性株系選擇準(zhǔn)確率達(dá)到95%以上。”戴小楓說(shuō)。
實(shí)質(zhì)性突破的新時(shí)代
有了這些技術(shù)積累,抗病棉種的選育工作就水到渠成了。繼對(duì)1112份陸地棉進(jìn)行抗性鑒定之后,攻關(guān)團(tuán)隊(duì)又對(duì)317份海島棉種質(zhì)資源進(jìn)行了黃萎病抗性鑒定,果然得到了積極的反饋:篩選出“多毛早”“新海4號(hào)”等高抗海島棉種質(zhì)46份。他們隨即用“多毛早”為父本、豐產(chǎn)性較好的中99 為母本雜交選育出第一個(gè)抗黃萎病棉花品種“中植372”。黃萎病發(fā)病率試驗(yàn)結(jié)果顯示,與感病對(duì)照“魯棉11”、抗病對(duì)照“中棉所12”相比,“中植372”的發(fā)病率只有10.4%,對(duì)黃萎病達(dá)到“高抗”級(jí)。
乘勝追擊。攻關(guān)團(tuán)隊(duì)繼續(xù)從“中植372”等162份抗黃萎病材料中選育,得到了突破性抗黃萎病新品種——“中植棉2號(hào)”。該品種抗性優(yōu)異,2004—2005年國(guó)家區(qū)域試驗(yàn)結(jié)果表明,“中植棉2號(hào)”黃萎指數(shù)僅為11.1,達(dá)到抗級(jí),對(duì)枯萎病由抗提高到免疫水平,抗蟲(chóng)性由中抗提高到高抗,實(shí)現(xiàn)了棉花對(duì)黃萎病由耐到抗的實(shí)質(zhì)性突破。
基于以上優(yōu)點(diǎn),“中植棉2號(hào)”2007年至今連續(xù)9年為國(guó)家黃河流域區(qū)“試抗黃萎病對(duì)照標(biāo)桿品種”,農(nóng)業(yè)部連續(xù)6年推介“中植棉2號(hào)”等為主導(dǎo)栽培品種,近10年來(lái)該品種棉花推廣面積已逾8000萬(wàn)畝。
戴小楓還告訴記者,課題共培育出“中植棉2號(hào)”“新植雜2號(hào)”“新陸中46號(hào)”等14個(gè)抗黃萎病棉花新品種,其中已有7個(gè)品種通過(guò)國(guó)審,6個(gè)通過(guò)省審。值得一提的是,2012年在新疆庫(kù)爾勒尉犁縣種植的“新陸中46號(hào)”還創(chuàng)下了連片百畝方畝產(chǎn)814公斤籽棉的產(chǎn)量紀(jì)錄。
由中科院院士朱玉賢、中國(guó)工程院院士喻樹(shù)迅等組成的專家組一致認(rèn)為,這一成果總體水平國(guó)際先進(jìn),其中抗病性鑒定技術(shù)和棉花抗黃萎病新品種選育技術(shù)居國(guó)際領(lǐng)先地位。該項(xiàng)突破2014年被授予國(guó)際“金袋鼠創(chuàng)新獎(jiǎng)”,是繼袁隆平、趙久然之后,我國(guó)科學(xué)家再次獲得的國(guó)際榮譽(yù)。
一度令國(guó)內(nèi)外同行束手無(wú)策的棉花“癌癥”黃萎病,就這樣由中國(guó)農(nóng)科院植物保護(hù)研究所、農(nóng)產(chǎn)品加工所和南京農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位組成的攻關(guān)團(tuán)隊(duì)攻克了。而抗黃萎病棉花品種的選育和推廣,終結(jié)了我國(guó)棉花生產(chǎn)無(wú)抗黃萎病品種可種的難題,我國(guó)棉花生產(chǎn)由此進(jìn)入了有抗黃萎病品種的新時(shí)代。
更重要的是,正如前文所說(shuō),黃萎病對(duì)作物的侵害不限于棉花。而抗病品種一旦在棉花上取得突破以后,對(duì)其他作物的抗病育種也具有方法和原理上的借鑒作用。
黃萎病菌還會(huì)變異嗎?答案是“會(huì)的”。戴小楓告訴記者,遺傳規(guī)律告訴我們,棉花黃萎病制病性變異與棉花的抗病是一場(chǎng)沒(méi)有止境的馬拉松賽跑,但只要掌握了根治的“法寶”,我們就一定能在這場(chǎng)賽跑中不斷取得勝利。