本發(fā)明公開了一種利用CRISPR-Cas9系統(tǒng)敲除甘藍(lán)型油菜BnMAX1基因的方法及應(yīng)用,設(shè)計(jì)了兩種特異性靶向甘藍(lán)型油菜BnMAX1基因的sgRNA并制成oligo二聚體,與Cas9載體連接,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)導(dǎo)入到甘藍(lán)型油菜下胚軸愈傷并再生成苗,Cas9核酸酶在sgRNA的引導(dǎo)下,剪切目標(biāo)序列,每條sgRNA都能通過CRISPR-Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)A和C基因組上BnMAX1基因的剪切,達(dá)到基因敲除的目的。經(jīng)過表型鑒定,發(fā)現(xiàn)純合突變株系增加了分枝數(shù)、單株角果數(shù),降低植株高度,同時(shí)也增加了產(chǎn)量。
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